Term
| Основные правила поведения в бактериологической лаборатории |
|
Definition
1. В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды: халата, тапочек, сменной обуви,
2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу.
3. При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дезинфицирующим раствором: переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дезинфицирующий раствор.
4. Если разбилась посуда. Содержащая заразный материал (пробирка, чашка Петри), немедленно производится обеззараживание предметов, ©дежды, стола и помещения.
5. После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола.
6. Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник, закрывают и опечатывают.
7. Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбудителями которых они работают. На кафедре микробиологии используются материалы, содержащие возбудителей III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской ГЭС. |
|
|
Term
| Правила забора материала для микробиологических исследования |
|
Definition
При заборе и работе с клиническим материалом персонал должен использовать перчатки и халат. Сроки доставки клинического материала в лабораторию должны быть сокращены до минимума.
Кровь для посева следует брать до начала антибактериальной терапии; на высоте подъема температуры; у постели больного с соблюдением правил асептики. Посев производится в двойную и тиогликолевую среду в соотношении 1:10.
Моча для посева берется до начала антибактериальной терапии. Моча здорового человека стерильна. От начала взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.
Гной получают с помощью стерильного шприца или стерильного ватного тампона.
Испражнения на патогенные энтеробактерии берут ректальными петлями, смоченными консервантом, и помещают в пробирку с консервирующей средой.
Слизь из носоглотки (на дифтерию) забирают стерильным тампоном натощак. Тампон помещают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию не позже 2-3 часов с момента забора материала.
Спинно-мозговую жидкость получают в результате люмбальной пункции. 3-5 мл ликвора помещают в пробирку (при транспортировке предохранять от охлаждения).
Мокроту собирают натощак после ополаскивания рта в стерильную посуду |
|
|
Term
| Правила забора материала, хранении и транспортировке при ООИ |
|
Definition
К особо опасным инфекциям прежде всего относится чума. При постановке предварительного диагноза «чума» в лаборатории проводятся срочные мероприятия:
1. Немедленно сообщают 8 вышестоящие органы здравоохранения,
2. На лабораторию накладывается карантин, т.е. ни один лабораторный работник, контактировавший с заразным материалом, не должен покидать помещения лаборатории до прибытия эпидемиолога.
3. Все материалы: от больных, чистые культуры и павшие животные должны быть направлены в специализированные лаборатории для окончательного установления диагноза.
Меры безопасности при транспортировке
Материал помещают в банки с плотно закрывающейся пробкой, обвязывают пергаментом(т.е. водонепроницаемым материалом), затем обвертывают салфетками, смоченными 5% раствором лизола или фенола. В таком виде банки с материалом помещают в металлические биксы. На банки с материалом наклеивают этикетки. Все надписи на этикетке делают простым графитным карандашом, г.к. надписи чернилами смываются при дезинфекционной обработке.
4. После отправки материала проводят заключительную дезинфекцию.
Культуру автоклавируют при температуре 120 ЯС в течение 1 часа.
Стеклянную лабораторную посуду обеззараживают в 3% растворе хлорамина или карболовой кислоты 1 сутки, а затем кипятят в 1% растворе бикарбоната натрия.
Трупы животных автоклавируют, заливают 10% раствором лизола на сутки и закалывают в специально вырытую яму.
Кожу открытых частей тела обрабатывают 70% раствором спирта. |
|
|
Term
| Составить направление на микробиологическое исследование |
|
Definition
Направление на исследование является сопроводительным документом, который прилагается к инфекционному материалу, предназначенному для лабораторных исследовании.
Составляется по следующей форме:
1. название материала
2. учреждение, направляющее материал
3. фамилия, имя отчество больного
4. возраст
5. адрес больного
6. дата заболевания
7. дата взятия материала
8. предполагаемый клинический диагноз
9. подпись врача, направляющего материал
Поступивший в лабораторию инфекционный материал регистрируется в специальном журнале. |
|
|
Term
| Дезинфекция в микробиологической лаборатории |
|
Definition
Дезинфекция-это обеззараживание объектов окружающей среды i помощью химических веществ, обладающих антимикробным действием.
Цель дезинфекции-предупредить передачу возбудителей ог инфицированного организма неинфицированному.
В микробиологической лаборатории используют:
1. хлорную известь (0,1-10% раствор);
2. хлорамин (0,5-5% раствор), для дезинфекции рук 0,25-0,5% раствор
для дезинфекции предметов ухода за больными при кишечных и воздушно^
капельных инфекциях 1-3% раствор, при туберкулезе-5% раствор;
3. фенол (карболовая кислота) в виде 3-5% раствора для дезинфекции
помещений;
4. лизол (3-5% раствор);
5. биглюконат хлоргексидина (гибитан), для дезинфекции рук 0,5%
раствор, для дезинфекции помещений 0,1% раствор;
6. дихлорид ртути (сулема)-иногда используют для дезинфекции
предметов ухода за больными. Препарат высокотоксичен, всасывается через
кожу. |
|
|
Term
| Подготовка посуды к стерилизации |
|
Definition
В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого специальную посуду:
Пробирки
- биологические- с крупным дном, неразвернутым краем;
- центрифужные- сужены книзу, конической формы;
- преципитационные- очень узкие с внутренним диаметром 2-3 мм
Стеклянные чашки Петри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеющего камней, пузырей. Высота чашки 20-30 мм, диаметр 60-200 мм.
Пипетки
- градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа
- пастеровские- стеклянные трубки диаметром ф-1 мм, у которых
один, конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра.
Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в сушильном шкафу.
, Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5-10 штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук.
Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы.
Стерилизация проводится в сухожировом шкафу при температуре 180 С в течение 1 часа. |
|
|
Term
| Этапы приготовления мазка. |
|
Definition
Для приготовления мазка необходимо иметь:
• Чистое обезжиренное предметное стекло.
• Бактериологическую петлю.
• Культуру, выращенную на плотной питательной среде- агаре, или
жидкой -бульоне.
• Спиртовку.
• Набор красок.
1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю
прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат
между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой
рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.
Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры
наносят петлей на предметное стекло.
Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на
предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в
котором эмульгируют внесенный материал.
Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким,
равномерно растертым, округлой формы, размером 1,5-2см..
2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре.
3. Фиксация мазка производится с целью:
• Убить микробные клетки.
• Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу.
• Обеспечить дальнейшее окрашивание.
Фиксация маз-ка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пламени должно длится 2 секунды.
Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших исподьзуюта химические фиксаторы:
• Метиловый спирт в течении 5-и минут.
• Этиловый спирт (96°) в течении 10-и минут.
• Смесь Никифорова —в течении 10-15 минут.
• Ацетон - в течении 5-и минут.
• Пары формалина — в течении нескольких секунд.
4. Окраска препаратов проводится:
• Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой
синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только
один краситель;
• Сложными методам, когда определяются клеточные структуры.
После экспозиции мазок промывают водой, высушивают
фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией. |
|
|
Term
| Основные правила микроскопии. |
|
Definition
Световой микроскоп - это обязательная принадлежность любой микробиологической лаборатории. Разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм. Общее увеличение микроскопа определяется произведением объектива на увеличение окуляра.
Микроскопия с сухими объективами дает увеличение в 120-600 раз. Недостаток: часть лучей отклоняется в сторону и не достигается хорошее освещение изучаемого объекта. Иммерсионные объективы - это объективы, которые погружают в жидкости (кедровое масло, персиковое масло). Поскольку показатели преломления стекла и иммерсионного масла практически одинаковы 1,52, сохраняется четкость и ясность поля зрения. Полезное увеличение микроскопа достигает 2000 раз. Современный микроскоп - это точный оптический прибор, поэтому необходимо строго соблюдать ряд правил при работе с ними:
1) использовать правильное освещение;
2) хранить закрытым от пыли;
3) для чистки оптических частей применять кисточку или мягкую
ткань, смоченную водой или спиртом. Раз в год микроскоп должен
просматривать мастер-оптик. |
|
|
Term
| Окраска мазка по Циль-Нильсену |
|
Definition
Метод используется для окраски спор и кислоустойчивых бактерий (мико-бактерии туберкулеза). Кислоустойчивость связана с наличием в
клеточной стенке миколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей, прогревания. Методика окраски:
1. На' фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в пламени до появления паров. Карболовый фуксин - основная краска; Прогревание - протрава.
2 Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают.
3 Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты.
4 Промывают водой. Серная кислота - обесцвечивающий фактор.
5 Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут. Синька Леффлера - дополнительная краска.
6 Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией. Кислоустойчивые бактерии и споры, рубиново-красного цвета, а остальная микрофлора- синего цвета. |
|
|
Term
| Определение подвижности микроорганизмов методами «раздавленной капли» и «висячей капли» |
|
Definition
Жгутики являются органами движения бактерий, состоят из белка флагеллина. По количеству и характеру расположения жгутиков различают бактерии: моно-трихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи. Жгутики обладают антигенными свойствами (Н-антиген) и дают возможность бактериям перемещаться в жидкой среде.
О наличии жгутиков можно нудить по характеру движения бактерий в «раздавленной» и «висячей» каплях при опущенном конденсоре и частично прикрытой диафрагме микроскопа.
Метод «раздавленной капли».
Культуру в изотоническом растворе хлорида натрия наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капля материала должна быть такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступала за пределы покровного. Препарат рассматривают с иммерсионной системой и слегка опущенным конденсором.
10
Метод «висячей капли».
Необходимо иметь предметное стекло с луночкой. Каплю культуры наносят на покровное стекло, сверху накладывают предметное стекло с луночкой посередине, края которого предварительно обмазаны вазелином. Затем предметное стекло слегка прижимают к покровному, и препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает. |
|
|
Term
| Этапы приготовления питательных сред |
|
Definition
К основным питательным средам, применяемым для культивирования большинства видов бактерий относятся мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар.
Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ)
Первый этап- получение мясной воды. Мясо, очищенное от жира и от сухожилий, пропускают через мясорубку, заливают двойным количеством холодной водопроводной воды и настаивают в течение суток в прохладном месте. Затем мясной настой вместе с мясом кипятят в течение часа, после чего остужают, фильтруют, доливают водопроводной водой до первоначального объема, разливают по бутылям и стерилизуют при давлении 1 атм. 30 минут.
Мясная вода содержит минеральные вещества, углеводы, витамины.
Второй этап- к мясной воде прибавляют 1% сухого пептона и 0,5% хлорида натрия, кипятят, устанавливают рН 20% раствором едкого натра. Приготовление мясо-пептонного агара (МПА)
К мясо-пептонному бульону добавляют 2% морской водоросли агар-агара, который плавится при 100°С и затвердевает при комнатной температуре. После стерилизации в автоклаве мясо-пептонный агар, разлитый в пробирки, оставляют застыть столбиком или готовят скошенный агар, укладывая пробирки в наклонном положении под углом 20°. |
|
|
Term
| Правила посева на жидкие питательные среды |
|
Definition
Посев из пробирки в пробирку
Обе пробирки держат в левой руке слегка наклонно, причем пробирку с посевным материалом держат ближе к себе. В правой руке, как писчее перо держат бактериальную петлю и прокаливают ее вертикально в пламени горелки. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают одновременно пробки из обеих пробирок, края пробирок обжигают в пламени горелки. Прокаленной петлей набирают немного посевного материала и вносят в пробирку с жидкой средой. Необходимо следить за тем, чтобы среда не выливалась и не касалась пробки. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирки обжигают и, проведя пробку через пламя горелки, закрывают пробирку, после чего прокаливают петлю. Посев жидкого
11
материала можно производить стерильными пастеровскими или градуированными пипетками. Пробирки с засеянной культурой этикируют и помешают в термостат.
13. - Правила посева на плотные питательные среды
Посев в чашку Петри шпателем **
Левой рукой приоткрывают крышку. Материал набирают, петлей или ув пипетку, наносят на поверхность МПА и втирают шпателем' по всей поверхности агара. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2-3 чашки для последовательного посева.
Посев в пробирку петлей
Полученные изолированные колонии служат для выделения чистой культуры микроба.
Осторожно приподняв крышку чашки, захватывают прокаленной и остуженной петлей одну отдельно расположенную колнию и вносят в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держат в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держат петлю с посевным материалом. Мизинцем, мякотью ладони правой руки вынимают пробку из пробирки, обжигают в пламени горелки ее край и вносят в нее петлю, посев производят: [ а) штрихами на поверхности агара;
б) уколом в столбик агара.
: При посевах и пересевах внимание работающего должно быть обращено на соблюдение правил стерильности: чтобы с одной стороны не загрязнять свои посевы посторонней.микрофлорой, а с другой - не являться источником инфекции для окружающих. |
|
|
Term
| Методы культивирования анаэробов |
|
Definition
Сущность условий, необходимых для культивирования анаэробов, заключается в снижении парциального давления молекулярного кислорода. Механические методы:
1. г Посев уколом в столбик сахарного агара.
2. Метод Виньял-Вейона: в расплавленный и остуженный до 50°С агар
вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в
пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24-48 в столбике
агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов.
3. Метод Перетца. Исследуемый материал вносят в 3 пробирки с
физиологическим раствором, а затем в 3 пробирки с остуженным до 50°С
МПА. Содержимое пробирок перемешивают и выливают в 3 стерильные
чашки Петри, на дно которых предварительно кладут стерильное предметное
стекло, через 18-20 часов инкубации в термостате под пластинками стекла
вырастают анаэробы.
12
Физические методы:
1. Анаэростат'- создание вакуумный условий.
2. Аппарат Киппа - замена воздуха индифферентным газом (водородом).
3. Среда Кит-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой
адсорбционной способностью, 0,5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят
на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слЬем вазелинового
масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода.
Химические методы:
1. Прибор Омелянского - для поглощения кислорода используется
пирогаллол.
2. Среда Вильсон-Блера. Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий,
хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления
сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с
хлоридом железа, образует осадок черного цвета - сернистое железо.
Биологический метод Фортнера
Чашку Петри с толстым слоем агара делят на 2 половины, на одну половину засевают облигатный анаэроб — «чудесную» палочку, на другую половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают растопленным парафином. Через 24-48 часов в чашке вырастают аэробы, затем, когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножатся анаэробы. |
|
|
Term
| Выделение чистой культуры анаэробов механические и биологические методы |
|
Definition
Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. Для выделения чистой культуры аэробов используют методы, основанные на:
1. Механическом разобщении бактериальных клеток
• Метод Дригальского - распределение капли суспензии материала с
помощью шпателя;
• Рассев штрихом;
• Метод Коха является количественным и позволяет определить
количество бактерий в исследуемом материале
2. Биологические методы:
• Посев на элективные среды;
• Метод Шукевича - посев материала в конденсат скошенного МПА для
выделения чистых культур бактерий, обладающих ползучим ростом
(например, протей);
• Обработка кислотами и щелочами (например, микобактерии
туберкулеза);
• Прогревание при 80°С для выделения споровых форм;
• Заражение лабораторных животных - для диагностики зоонозов и др.
(туляремия).
Метод Дригальского основан на механическом разобщении на поверхности плотной, питательной среды микробов всех видов, входящих в состав исследуемого материала.
I этап.
1. Определение микробного состава исследуемого материала (приготовление
мазка* окраска по Граму). v
2. Посев на чашку Петри: одну каплю материала наносят на поверхность
МПА и растирают шпателем. Не обжигая шпателя и не набирая нового
материала, засевают вторую и третью чашки.
3. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и инкубируют в термостате
18-20 часов при температуре 37°С.
II этап.
1. Макроскопическое изучение колоний по величине, форме, окраске,
характеру поверхности, краев, консистенции. .
2. Микроскопическое изучение одной исследуемой колонии (приготовление
мазка, окраска по Граму).
3. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром.
4. Пробирку инкубируют в термостате 18-20 часов при температуре 37°С.
III этап.
Проверка культуры на чистоту (макроскопическим - однородный рост, микроскопическим — однородные по морфологическим признакам и тинкториальным признаками клетки).
IV этап.
Идентификация проводится по:
- ферментативным свойствам.
- антигенным свойствам, токсигенности и другим признакам
- фагочувствительности |
|
|
Term
| Выделение чистой культуры анаэробов |
|
Definition
I этап — обогащение на среде Китт-Тароцци, предварительно прокипяченной
в течение 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для
уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются.
II этап - получение изолированных колоний. На среде Китт-Тароцци
обнаруживается помутнение с пузырьками газа.
Ш этап - выделение чистой культуры проводится по одному из следующих
методов:
А) По Цейсслеру - каплю материала со среды Китт-Тароцци засевают в
чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же
шпателем производят посев во второй и третьей чашках;
Б) По Вейнбергу - каплю материала со среды Китт-Тароцци переносят в
растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки
Веньял-Вейона и инкубируют в термостате.
IV и V этапы - идентификация в реакции нейтрализации на белых мышах. |
|
|
Term
| Заражение куриного эмбриона |
|
Definition
Куриный эмбрион используется для культивирования вирусов, микоплазм. Используют эмбрионы в возрасте 8-14 дней в зависимости от вида вируса и способа заражения: на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полость, в желточный мешок. Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона в овоскопе и отмечают карандашом на скорлупе границы воздушного мешка. Заражение куриных эмбрионов производят в боксе в строго асептических условиях, пользуясь инструментом, стерилизованным кипячением.
1этап
Скорлупу над воздушным пространством протирают спиртом, обжигают в пламени, смазывают 2% раствором йода, снова протирают спиртом и обжигают. Вирусный материал в количестве 0,05 - 0,2 мл наносят на хорион-аллантоисную оболочку туберкулиновым шприцом или пастеровской пипеткой.
II этап
Вскрытие эмбрионов проводят через 48-72 часа инкубации в термостате. Наличие вируса в хорион-аллантоисной оболочке определяют:
1. по белесоватым непрозрачным пятнам разной формы;
2. в реакции гемагглютинации. |
|
|
Term
|
Definition
Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом Христианом Грамом и является важным таксономическим признаком.
К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.
Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.
Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.
Методика окраски.
1 .На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.
2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.
15
3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.
6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией. |
|
|
Term
| Постановка серологических реакций - РА на стекле. |
|
Definition
Реакция широко применяется для серологической идентификации
выделенных микробов, а также при постановке ускоренных серологических
реакций.
Постановка реакции:
Пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю сыворотки в
нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-часовой
агаровой живой культуры или каплю диагностикума. Постановка реакции
должна сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки. Учет
реакции производят через 5-10 минут.
Компоненты:
1. Антигены неизвестного вида;
2. Известная иммунная сыворотка;
3. Физиологический раствор. |
|
|
Term
| Подготовка и учет объемной РА |
|
Definition
а) реакция Видаля
Реакция агглютинации широко применяется в лабораторной практике для серодиагностики. Реакция агглютинации протекает в две фазы:
1 фаза - соединение антигена с антителом;
2 фаза - адсорбция на комплексе антиген+антитело физиологического
раствора и выпадение осадка двух видов:
а) крупнохлопчатого - у жгутиковых бактерий (Н-агглютинация);
б) мелкозернистого - агглютинат образуется в виде компактных зерен
(О-агглютинация).
Компоненты реакции Видаля:
16
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1:100, 1:200, 1:400, 1:800,
1:1600;
2) диагностикумы - взвесь убитых сальмонелл трех видов: брюшного
тифа, паратифа А и В;
3) физиологический раствор.
Цель реакции: определение титра антител в испытуемой сыворотке.
Реакция агглютинации должна сопровождаться контролем антигена и сыворотки. Реакция ставится в трех рядах. Учет результатов проводят через 18-20 часов.
Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами: + + + + полная агглютинация + + + неполная агглютинация + + слабая агглютинация - осадка нет (отрицательная реакция) б) реакция Вейгля
Ставится с 8 дня болезни при сыпном тифе и болезни Брилля-Цинссера для обнаружения антител в испытуемой сыворотке крови. Компоненты реакции Вейгля:
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800;
2) риккетсиозный диагностикум - взвесь убитых риккетсий Провачека
3) физиологический раствор
Реакция применяется при рецидивах эпидемического сыпного тифа (болезни Брилля-Цинссера), обусловленных реактивацией риккетсий Провачека в сыпнотифозных гранулемах. |
|
|
Term
| Опсоно-фагоцитарная реакция |
|
Definition
Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.
Компоненты реакции:
1) антиген - суточная микробная культура;
2) испытуемая сыворотка больного;
3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;
4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.
Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.
24
Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированных микрс контроле.
Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп
Чем выше опсонический индекс (должен быть >1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе). |
|
|
Term
| Реакция торможения гем-АГ |
|
Definition
Эта реакция применяется в вирусологической практике:
- для определения типа вируса (на стекле);
- для обнаружения в сыворотке больных (развернутая).
При постановке ориентировочной реакции торможения гемагглютинации на стекло наносят по 1 капле типоспецифических иммунных сывороток, затем добавляют по 1 капле испытуемого материала и 1 капле 5% взвеси эритроцитов.
Учет результатов: тип вируса определяют по той сыворотке, с которой реакция не произошла, так как иммунная сыворотка, специфическая для выделенного вируса, подавляет его гемагглютинирующую активность, и эритроциты не агглютинируются. |
|
|
Term
| Реакция нейтрализации вирусов |
|
Definition
Реакция нейтрализации основана на способности специфических иммунных сывороток гасить инфекционное действие вирусов. Применяется в двух направлениях:
1) для типирования выделенных вирусов;
2) для титрования антител в сыворотках переболевших.
Постановка реакции:
1. На лабораторных животных. Критерием наличия вируса
служит гибель лабораторных животных. Высчитывается LD50
- предельное разведение вирусной суспензии, которое
вызывало гибель 50% зараженных животных. Для
идентификации вируса клещевого энцефалита проводят
внутримозговое заражение белых мышей.
2. В тканевых культурах. Учет результатов проводят
- по цитопатическому действию (ЦПД)
- по методу цветной пробы, основанной на изменении цвета
индикатора среды в результате дегенерации клеток;
- по гемадсорбции.
3. В Курином эмбрионе. Учет результатов проводится по
появлению оспин по хорионаллантоисной оболочке. |
|
|
Term
|
Definition
Протекает in vitro (в пробирке) при эквивалентном соотношении антигена и антитела. Сопровождается помутнением и выпадением осадка. Феномен флокуляции используют:
- для определения флоккулирующей активности токсинов;
- для титрования антитоксических сывороток.
Например, при дифтерии используется реакция флокуляции с дифтерийным анатоксином. В пробирке, где количество сыворотки и анатоксина эквивалентно, выпадают нежные хлопья. Количество анатоксина, дающее в смеси 1 АЕ сыворотки инициальную флокуляцию, называется 1 иммуногенной единицей анатоксина (1 ИЕ). |
|
|
Term
|
Definition
Антитоксический противодифтерийный иммунитет проверяют с помощью РПГА с дифтерийным эритроцитарным диагностикумом (анатоксином).
Неимунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мг
Ингредиенты:
1. Испытуемая сыворотка, адсорбированная бараньими эритроцитами;
2. Эритроцтарный диагностикум;
3. Физиологический раствор;
4. Противодифтерийная контрольная сыворотка активностью 10 ME.
Постановка реакции:
1) Сыворотку разводят физиологическим раствором в 12 лунках от
1:10 до 1:20480(1:40-1:5120)
2) В каждую лунку добавляют по 1 капле диагностикума;
3) Противодифтерийную контрольную сыворотку разводят также от
1:10 до 1:20480 и вносят по 1 капле диагностикума;
4) Оставляют на 3 часа при комнатной температуре. |
|
|
Term
|
Definition
Реакция относится к серологическим реакциям с участием меченых антигенов или антител.
Проводится прямым и непрямым методами.
При прямом методе обнаруживают антиген в материале от больного. Используется диагностическая флюоресцирующая сыворотка, которая содержит иммуноглобулины, выделенные из иммунных сывороток и меченные флюорохромами.
Специфический антиген обнаруживается в виде ярко-зеленых люминесцирующих конгломератов, а фон препарата окрашивается в оранжево-красный цвет.
Компоненты реакции прямой иммунофлюоресценции:
Для поиска антигена при экспресс-диагностике:
1) исследуемый материал;
2) специфическая люминесцентная сыворотка;
3) люминесцентный микроскоп.
При диагностике гриппа проводят дифференциацию от возбудителей парагриппа и аденовирусной инфекции. Носоглоточный мазок обрабатывают флюоресцирующей гриппозной сывороткой или гриппозным иммуноглобулином.
«+» результат в виде зеленого свечения получают через 3 часа.
При непрямом методе проводят обнаружение и титрование специфических антител. Титром сыворотки называется ее максимальное разведение, при котором отмечается флюоресценция на «+ +».
Компоненты реакции непрямой иммунофлюоресценции
Для поиска антигена при экспресс-диагностике:
1) исследуемый материал (антиген);
2) специфическая сыворотка;
3) антиглобулиновая люминесцентная сыворотка
4) люминесцентный микроскоп.
/ фаза специфическая
Сывороточные антитела адсорбируются на антигене.
// фаза неспецифическая
Используется антиглобулиновая сыворотка с антителами, меченными флюорохромами. Образуется комплекс антиген+антитело (I) + антиглобулиновая сыворотка (II), который светится. |
|
|
Term
|
Definition
Полимеразная цепная реакция имитирует естественную репликацию ДНК и позволяет обнаружить единственную молекулу ДНК в присутствии других молекул.
Суть метода заключается в размножении в пробирке определенных участков ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов. На каждом цикле вновь синтезированные молекулы копируются ДНК-полимеразой. Благодаря этому происходит многократное удвоение специфических фрагментов ДНК. Термостабильная ДНК-полимераза, полученная из термофильных бактерий, служит катализатором ПЦР.
В ПЦР участвуют праймеры - две искусственно синтезированные молекулы ДНК, которые комплементарны последовательностям ДНК на левой и правой границах специфического фрагмента. Синтез протекает только между праймерами, и количество копий фрагмента удваивается.
Этапы цикла амплификации:
1. Денатурация ДНК при t=95°C 1 мин.
2. Отжиг (присоединение) праймеров, t=50-65°C 1-2 мин.
3. Синтез фрагмента ДНК, t=72°C 1-3 мин.
Продукты синтеза первого цикла амплификации служат матрицей для второго цикла, а продукты синтеза второго цикла - матрицей для третьего цикла амплификации. Цикл амплификации проводится в термо-циклере или амплификаторе. За 30 циклов амплификации образуется 10 копий специфического фрагмента.
21
Достоинства ПЦР:
1) высокая чувствительность и специфичность;
2) быстрота;
3) возможность диагностики внутриклеточных паразитов и
персистирующих микроорганизмов;
4) использование клинического материала, взятого от больного. |
|
|
Term
|
Definition
При ИФА в качестве метки применяют ферменты. Используется в диагностике СПИДа и вирусных гепатитов. Иммуноферментная система «Гепа Стрип» предназначена для выявления поверхностного HbsAg антигена вируса гепатита В.
Компоненты:
1. Полистироловый планшет;
2. Антитела к HbsAg;
3. Конъюгат - мышиные моноклониальные антитела, меченые
пероксидазой;
4. Контрольные сыворотки;
5. Фосфатно-солевой буфер;
6. Ортофенилдиамин (ОФД).
Реакция протекает в две фазы. HbsAg связывается с гомологичными антителами, меченными пероксидазой. Затем ставят цветную реакцию с использованием ОФД, происходит желтое окрашивание.
Учет ИФА - по оптической плотности с помощью фотометра, при этом степень оптической плотности будет обратно пропорциональна концентрации HbsAg антигена вируса гепатита В. |
|
|
Term
|
Definition
Реакция фаголизиса ставится для идентификации возбудителя дизентерии.
Постановка реакции:
1) чистая культура шигелл на скошенном агаре;
2) 2 пробирки с МПБ - «опыт» и «контроль»;
3) дизентерийный бактериофаг
На I этапе:
1) Проверка культуры шигелл на чистоту (окраска по Граму);
2) Посев в 2 пробирки с МПБ
3) В пробирку «опыт» добавить 2 капли (0,1 мл) дизентерийного
бактериофага;
4) Посевы инкубировать в термостате 18-20 часов при темпратуре 37°С
На II этапе:
1) Регистрация результатов посева
В пробирке «контроль» имеется равномерное помутнение МПБ, т.к. культура шигелл оказалась жизнеспособной. В пробирке «опыт» МПБ
20
прозрачный, т.е. дизентерийный бактериофаг вызвал лизис одноименной культуры бактерий. |
|
|
Term
|
Definition
Определение фаготипа проводится с помощью специальных наборов типовых фагов и является одним из методов внутривидовой дифференциации бактерий. Цели фаготипиривания:
1. Помощь эпидемиологу в выявлении источников и путей
циркуляции инфекции при внутрибольничном
заражении;
2. Для идентификации микроба.
Определение фаготипа стафилококка проводят при помощи фагов, разведенных до тест- разведения, обозначенного на этикетке. Каплю 4-х часовой бульонной культуры распределяют на поверхности подсушенного агара в чашке Петри. Дно чашки расчерчивают на 22 квадрата по числу фагов, затем капают фаги по одному в каждый квадрат. Посев инкубируют в термостате 18 часов* при температуре 37°С. На 2-й день проводят учёт результатов; фаготип культуры соответствует тому фагу, который в тест-разведении вызывает её полный лизис. В зависимости от чувствительности культуры к фагу наблюдается разная степень лизиса:
+ + + + - сплошной лизис
+ + + - сливной лизис с вторичным ростом
+ + - более 50 негативных колоний (стерильных пятен)
+ - единичные негативные колонии (стерильные пятна)
- лизиса нет
Также проводится фаготипирование брюшнотифозных (44 типа) и паратифозных бактерий (15 типов), энтеропатогенных эшерихий (24 типа). |
|
|
Term
|
Definition
«бумажных дисков»
Биологическая активность антибиотиков выражается в международных единицах (ME). За единицу активности принимается то минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма, определенного вида микроорганизма в строго определенных условиях. Степень чувствительности к антибиотикам необходимом определять для успешного проведения лечения. Наиболее распространен метод «бумажных дисков»: в чашку Петри с МПА «газоном» засевают взвесь изучаемой культуры микроба. На засеянную поверхность агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Диски располагают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии от края чашки 15 мм. Чашки выдерживают в термостате 18-20 часов при температуре 37 °С. Учёт результатов проводят на 2-ой день путем измерения зон задержки роста. Диаметр зоны задержки роста:
Меньше 10 мм - штамм устойчивый
11-15 мм - штамм малоустойчивый
15-25 мм - штамм чувствительный
19
больше 25мм - штамм высокочувствительный. |
|
|
Term
|
Definition
Реакция гемагглютинации- это один из методов индикации вирусов. Ставится двумя методами:
1) капельным на стекле;
2) в пробирках - развернутая реакция.
Компоненты:
1) исследуемый материал: аллантоисная жидкость, суспензия
хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона, экстракт из
культуры клеток, зараженных вирусом;
2) 5% взвесь куриных эритроцитов;
3) физиологический раствор.
На чистое обезжиренное стекло наносят 1 каплю взвеси эритроцитов и 1 каплю исследуемого материала.
При «+» результате - хлопья агглютинации эритроцитов. |
|
|
Term
| Определение титра и рабочей дозы комплемента |
|
Definition
Комплемент - неспецифический термолабильный фактор используется в ряде серологических реакций.
Титр 'комплемента - это минимальное количество, которое способно гемолизировать эритроциты в гемолитической системе.
Рабочая доза комплемента превышает титр на 20-25%, так как любой антиген может обладать антикомплементарными свойствами, к титру делают надбавку. Например, если титр 0,4мл, то рабочая доза должна быть 0,5мл.
18
Компоненты реакции:
1) антиген - 3% взвесь эритроцитов барана;
2) гемолитическая сыворотка, полученная при гипериммунизации
кролика эритроцитами барана;
3) комплемент - свежая или лиофильно высушенная сыворотка
крови морской свинки.
Смесь равных объемов взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки представляет собой гемолитическую систему, используемую во второй фазе РСК.
«+» реакция характеризуется наличием гемолиза;
«-» реакция характеризуется отсутствием гемолиза. |
|
|
Term
| Постановка и учет РСК (по Борде-Жангу) |
|
Definition
Реакция связывания комплемента - это сложная двухсистемная серологическая реакция.
Тест-система состоит из комплекса антиген-антитело.
Визуально результат реакции невидим. Индикаторная система состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. Образующиеся комплексы обеих систем способны связывать комплемент.
При положительном результате антиген и антитело тест-системы комплементарны, на образовавшемся комплексе адсорбируются комплимент в рабочей дозе, гемолиз не происходит.
При отрицательном результате в испытуемой сыворотке антитела отсутствуют и комплекс антиген-антитело не формируется, оставшийся свободным комплемент адсорбируется на гемолитической системе и происходит гемолиз.
РСК Борде-Жангу ставится при хронической гонорее (у женщин).
Компоненты РСК Борде-Жангу:
1) испытуемая сыворотка в разведении 1:5;
2) гонококковый антиген;
3) комплемент в рабочей дозе;
4) 3% взвесь эритроцитов барана;
5) гемолитическая сыворотка.
Реакция ставится в 2-х пробирках.
«+» результат - отсутствие гемолиза эритроцитов; «-» результат - наличие гемолиза эритроцитов. |
|
|
Term
| Постановка и учет РСК (по Борде-Жангу) |
|
Definition
Реакция связывания комплемента - это сложная двухсистемная серологическая реакция.
Тест-система состоит из комплекса антиген-антитело.
Визуально результат реакции невидим. Индикаторная система состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. Образующиеся комплексы обеих систем способны связывать комплемент.
При положительном результате антиген и антитело тест-системы комплементарны, на образовавшемся комплексе адсорбируются комплимент в рабочей дозе, гемолиз не происходит.
При отрицательном результате в испытуемой сыворотке антитела отсутствуют и комплекс антиген-антитело не формируется, оставшийся свободным комплемент адсорбируется на гемолитической системе и происходит гемолиз.
РСК Борде-Жангу ставится при хронической гонорее (у женщин).
Компоненты РСК Борде-Жангу:
1) испытуемая сыворотка в разведении 1:5;
2) гонококковый антиген;
3) комплемент в рабочей дозе;
4) 3% взвесь эритроцитов барана;
5) гемолитическая сыворотка.
Реакция ставится в 2-х пробирках.
«+» результат - отсутствие гемолиза эритроцитов; «-» результат - наличие гемолиза эритроцитов. |
|
|
Term
| Реакция нейтрализации токсина антитоксином |
|
Definition
Реакция нейтрализации токсина антитоксином по Оухтерлони проводится для определения токсигенности дифтерийной палочки, что особенно важно для эпидемиологии и диагностики данной инфекции.
В чашку Петри с МПА накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической дифтерийной сывороткой. По обеим сторонам бумаги засевают изучаемые культуры в виде штрихов и бляшек. В каждой чашке делают контрольный посев штамма PV-8. Через 24-48 часов инкубации в термостате при наличии у культуры токсина, последний диффундирует в агар. На месте встречи токсина с антитоксином образуются белые линии преципитата. |
|
|
Term
|
Definition
Реакция преципитации относится к серологическим реакциям при бактериальных инфекциях и отличается высокой чувствительностью и специфичностью.
Феномен преципитации заключается в том, что преципитины, соединяясь с преципитиногенами, вызывают выпадение осадка-преципитата.
Реакция Асколи ставится с целью обнаружения в органах трупа сибиреязвенного антигена.
Компоненты реакции:
1) антиген - термоэкстракт из измельченных кусочков органов;
2) диагностическая сыворотка;
3) физиологический раствор.
Реакция ставится в узких преципитационных пробирках: наливают по 0,1 мл неразведенной сыворотки, затем по стенке пробирки наслаивают на сыворотку антиген.
При «+» результате на границе обеих жидкостей образуется плотное белое кольцо. |
|
|
Term
|
Definition
Ставится с 8 дня болезни при сыпном тифе и болезни Брилля-Цинссера для обнаружения антител в испытуемой сыворотке крови. Компоненты реакции Вейгля:
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800;
2) риккетсиозный диагностикум - взвесь убитых риккетсий Провачека
3) физиологический раствор
Реакция применяется при рецидивах эпидемического сыпного тифа (болезни Брилля-Цинссера), обусловленных реактивацией риккетсий Провачека в сыпнотифозных гранулемах. |
|
|
Term
|
Definition
Реакция агглютинации широко применяется в лабораторной практике для серодиагностики. Реакция агглютинации протекает в две фазы:
1 фаза - соединение антигена с антителом;
2 фаза - адсорбция на комплексе антиген+антитело физиологического
раствора и выпадение осадка двух видов:
а) крупнохлопчатого - у жгутиковых бактерий (Н-агглютинация);
б) мелкозернистого - агглютинат образуется в виде компактных зерен
(О-агглютинация).
Компоненты реакции Видаля:
16
1) испытуемая сыворотка в разведениях 1:100, 1:200, 1:400, 1:800,
1:1600;
2) диагностикумы - взвесь убитых сальмонелл трех видов: брюшного
тифа, паратифа А и В;
3) физиологический раствор.
Цель реакции: определение титра антител в испытуемой сыворотке.
Реакция агглютинации должна сопровождаться контролем антигена и сыворотки. Реакция ставится в трех рядах. Учет результатов проводят через 18-20 часов.
Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами: + + + + полная агглютинация + + + неполная агглютинация + + слабая агглютинация - осадка нет (отрицательная реакция) |
|
|
Term
| Постановка реакций АГ на стекле |
|
Definition
Реакция широко применяется для серологической идентификации
выделенных микробов, а также при постановке ускоренных серологических
реакций.
Постановка реакции:
Пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю сыворотки в
нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-часовой
агаровой живой культуры или каплю диагностикума. Постановка реакции
должна сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки. Учет
реакции производят через 5-10 минут.
Компоненты:
1. Антигены неизвестного вида;
2. Известная иммунная сыворотка;
3. Физиологический раствор. |
|
|
